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技術(shù)文章

CAR-T細胞療法

更新時間:2022-04-15 瀏覽次數(shù):2470

2021年6月22日,復星凱特CAR-T細胞治療產(chǎn)品益基利侖賽注射液(又稱阿基侖賽,代號:FKC876)已正式獲得批準。


2021年9月1日,藥明巨諾靶向CD19的CAR-T產(chǎn)品瑞基奧侖賽注射液(Relma-cel,商品名:倍諾達)已正式獲批。至此,我國已有2款CAR-T產(chǎn)品獲批上市。


關(guān)于CAR-T療法的“神奇"效果,也貼上了各種標簽:“天價,120萬一針"、“只需要注射一次、癌細胞清零"、“2個月癌細胞清零"、“抗癌神藥"、“可以治愈癌癥"……


一、什么是CAR-T療法呢?

在體內(nèi),T細胞是發(fā)揮免疫效應(yīng)的主力,但T細胞受體 (TCR)一般在主要組織相容性復合體(MHC)出現(xiàn)的情況下才能被激活,而腫瘤細胞有降低 MHC class I 分子表達的能力,從而避免被免疫系統(tǒng)識別。

腫瘤細胞逃過TCR的識別,發(fā)生免疫逃逸,T細胞便不能發(fā)揮作用。機體便無法通過免疫反應(yīng)去殺傷腫瘤。為了克服TCR的這一限制,嵌合抗原受體(CAR)應(yīng)運而生。

CAR-T細胞是經(jīng)過基因工程改造、以表達靶向特定抗原的嵌合受體T細胞(Chimeric Antigen Receptor T-Cell),它能幫助T細胞識別、并消滅相應(yīng)抗原的細胞。

正常的T細胞的TCR識別的多為靶細胞內(nèi)部的肽段,而且識別必須是依賴靶細胞的MHC分子的展示。

CAR-T細胞通過CAR識別靶細胞的表面抗原,包括細胞表面的受體、配體等蛋白,增加了靶點識別的廣度,且這種識別不具有MHC限制。

因此,可以減輕T細胞受體(TCR)誘導免疫的局限性。治療時,患者血液中的T細胞被提取出,經(jīng)過改造后可表達出嵌合抗原受體,從而識別并攻擊表達特定抗原的腫瘤細胞及其他細胞。

簡單來說CAR-T技術(shù)就如同給你的T細胞裝上了“GPS導航系統(tǒng)",能自動識別癌細胞,并進行殺傷,成為免疫軍團中的“超級特戰(zhàn)隊"。



二、CAR-T細胞療法可分為以下步驟:

治療前評估:通過一系列的評估判斷患者是否適合CAR-T細胞治療(在其它治療手段失效后);

T細胞的分離與富集:通過白細胞分離術(shù)收集患者的外周血單核細胞(PBMC細胞),再分離出特定的T細胞亞群;

T細胞改造:T細胞在實驗室內(nèi)進行基因工程改造,這是CAR-T細胞生產(chǎn)的核心技術(shù),利用到載體將CAR基因?qū)隩細胞,使細胞表面表達嵌合抗原受體;

擴增:體外培養(yǎng),大量擴增CAR-T細胞至所需數(shù)量,一般為十億至百億級別,需要幾周左右;

回輸:把擴增好的CAR-T細胞輸回病人體內(nèi);

恢復:嚴密監(jiān)護病人,控制前幾天身體的劇烈反應(yīng)。患者通過CAR-T細胞的治療,病情得到緩解或治愈。


CAR-T治療流程圖


三、MACS 技術(shù)磁分選金標準  

MACS微珠是一種與高度特異性單克隆抗體相偶聯(lián)的超順磁化微粒,用于目的細胞分離或者去除細胞的磁性標記。


微珠直徑約有50nm,比細胞小200多倍,體積為細胞的百萬分之一,光學顯微鏡下不可見。微珠由多聚糖和氧化鐵組成,無細胞毒性,對細胞無損傷,可以生物降解


MACS微珠主要有三種:直標微珠、間標微珠、多選微珠。

圖片



四、MACS 細胞磁性分選基本流程

磁珠標記

磁性分選

磁珠標記細胞洗脫



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