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化學(xué)發(fā)光 | IVD行業(yè)技術(shù)擔(dān)當(dāng)(下)

更新時(shí)間:2022-04-13 瀏覽次數(shù):2957

上一期,我們大致介紹了化學(xué)發(fā)光免疫分析的原理和優(yōu)缺點(diǎn),下面我們就來(lái)詳細(xì)說(shuō)說(shuō)三種分類(lèi)的不同之處。
 

 

01

 

直接化學(xué)發(fā)光免疫分析

直接化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)是用化學(xué)發(fā)光劑直接標(biāo)記抗原或抗體的免疫分析方法。常用于標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光物質(zhì)有吖啶酯類(lèi)化合物——acridinium ester (A E) , 是有效的發(fā)光標(biāo)記物。其通過(guò)起動(dòng)發(fā)光試劑(NaOH?、H?O?)作用而發(fā)光,強(qiáng)烈的直接發(fā)光在一秒鐘內(nèi)完成, 為快速的閃爍發(fā)光。
 
吖啶酯作為標(biāo)記物用于免疫分析,其化學(xué)反應(yīng)簡(jiǎn)單、快速、無(wú)須催化劑;檢測(cè)小分子抗原采用競(jìng)爭(zhēng)法,大分子抗原則采用夾心法,非特異性結(jié)合少,本底低;與大分子的結(jié)合不會(huì)減小所產(chǎn)生的光量, 從而增加靈敏度。
 
CLIA開(kāi)發(fā)主要包括以下幾個(gè)步驟:
 

磁珠包被抗體

( 以下步驟需依據(jù)項(xiàng)目不同進(jìn)行工藝優(yōu)化 )

BeaverBeads®Streptavidin鏈酶親和素磁珠

利用鏈酶親和素和生物素的高特異性結(jié)合能力,BeaverBeadsRStreptavidin可與biotin標(biāo)記的高純度抗體/多肽分子或核酸分子特異性結(jié)合,并具有級(jí)聯(lián)放大的作用,是一種通用的具有標(biāo)記和捕獲性能的固相介質(zhì)原料。

 

根據(jù)粒徑的不同,產(chǎn)品可用免疫檢測(cè)、探針捕獲、細(xì)胞分選等領(lǐng)域,尤其適用于化學(xué)發(fā)光免疫診斷。相關(guān)海貍產(chǎn)品如下:

圖片
 
BeaverBeads®NHS生物配體快速偶聯(lián)磁珠

表面為NHS基團(tuán)修飾的磁珠,能夠與帶有伯胺基團(tuán)的蛋白和其他分子形成穩(wěn)定的肽鍵,用于親和純化或者分析檢測(cè)抗體、抗原和其他生物分子。

 

與傳統(tǒng)的羧基、氨基磁珠相比,無(wú)需事先采用EDC/NHS或戊二醛進(jìn)行活化,只需簡(jiǎn)單講含伯氨基的生物配體溶解于偶聯(lián)緩沖液中,室溫下將蛋白溶液與NHS磁珠混合即可將生物配體共價(jià)偶聯(lián)到磁珠上,偶聯(lián)效率可達(dá)90%以上;偶聯(lián)體系pH為5-9. 相關(guān)海貍產(chǎn)品如下:

圖片
 
BeaverBeads®Polymer聚合物磁珠

具有快速磁響應(yīng)性超順磁性、良好的分散性、粒徑均一、極低的非特異性吸附和豐富的結(jié)合位點(diǎn)等特點(diǎn)。在特定試劑(如EDC/NHS)作用下,將多種生物配體(蛋白、多肽、寡聚核苷酸、藥物分子等)共價(jià)偶聯(lián)到磁珠表面。常用于檢測(cè)、捕獲等試驗(yàn)。相關(guān)海貍產(chǎn)品如下:

圖片

 
Beaver Magnetic Seprator stand磁性分離器

為快速分離磁珠的手工操作或高通量的自動(dòng)化操作而設(shè)計(jì)的一系列不同規(guī)格的專用磁性分離工具,適用于抗體純化、免疫沉淀、免疫共沉淀、細(xì)胞分選、核酸分離等相關(guān)實(shí)驗(yàn)。相關(guān)海貍產(chǎn)品如下:

圖片
 

吖啶酯標(biāo)記抗體

①將0.5mg抗體用標(biāo)記緩沖液(0.1M pH7.4 PB)預(yù)處理;
②將0.1mg的吖啶鹽加入到預(yù)處理的抗體中,放置于恒溫?fù)u床中避光孵育過(guò)夜;
③標(biāo)記完成后,將結(jié)合物純化,加入BSA等蛋白保護(hù)劑,4℃避光保存。
 
吖啶酯是一類(lèi)可用作化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物的化學(xué)物質(zhì),吖啶酯或吖啶磺酰胺類(lèi)化合物在有H?O?的稀堿性溶液中即能發(fā)光,不需要催化劑,發(fā)光系統(tǒng)簡(jiǎn)單。
 
同時(shí)這類(lèi)化合物的發(fā)光為閃光型,加入發(fā)光啟動(dòng)試劑后0.4s左右發(fā)射光強(qiáng)度即達(dá)到最大,半衰期為0.9s左右,非常省時(shí)。
 
基于上述特點(diǎn),為增強(qiáng)吖啶酯或吖啶磺酰胺類(lèi)化合物的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度,有些在發(fā)光啟動(dòng)試劑中加入triton x-100、tween-20等表面活性劑。相關(guān)產(chǎn)品如下:
圖片
 

上機(jī)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

①將磁珠包被物和吖啶酯標(biāo)記物分別稀釋至工作濃度,配成試劑;
②設(shè)置全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光儀,裝載試劑,標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)控品樣本分別上機(jī),選擇對(duì)應(yīng)的項(xiàng)目,直接進(jìn)行檢測(cè);
③檢測(cè)剩余時(shí)間及檢測(cè)結(jié)果會(huì)顯示在屏幕上,可通過(guò)“查詢”查看歷史數(shù)據(jù),點(diǎn)擊“導(dǎo)出”可將數(shù)據(jù)保存為Excel格式文件。
 

02

 

間接化學(xué)發(fā)光免疫分析

間接化學(xué)發(fā)光免疫分析又稱化學(xué)發(fā)光酶免疫分析,以酶標(biāo)記生物活性物質(zhì)進(jìn)行免疫反應(yīng),免疫復(fù)合物上的酶再作用于發(fā)光底物,在信號(hào)試劑作用下發(fā)光,用發(fā)光信號(hào)測(cè)定儀進(jìn)行發(fā)光測(cè)試。常用的標(biāo)記為HRP和AP,它們的底物分別為魯米諾AMPPD
 
1
具體工藝流程:
 
 

包被抗體的磁性微粒

 

加入樣本、標(biāo)準(zhǔn)品

 

清洗

 

加入酶標(biāo)抗體/生物素化抗體

 

洗板

 

加入鏈酶親和素HRP

 

清洗

 

加入底物液

 

測(cè)試發(fā)光信號(hào)(如是板式發(fā)光可參考Elisa操作方式

 

化學(xué)發(fā)光 (ECL)底物相關(guān)產(chǎn)品:
圖片

 

03

 

電化學(xué)發(fā)光免疫分析

電化學(xué)發(fā)光免疫分析(ECLIA)是電化學(xué)發(fā)光和免疫測(cè)定相結(jié)合的產(chǎn)物,是標(biāo)記免疫測(cè)定技術(shù)之一。
 
在電極表面有電化學(xué)引發(fā)的特異性化學(xué)發(fā)光反應(yīng),用電化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕 [Ru(bpy) 3 ] 2+ 標(biāo)記 Ab,通過(guò) Ag-Ab 反應(yīng)和磁珠分離技術(shù),根據(jù)三聯(lián)吡啶釕在電極上發(fā)出的光強(qiáng)度對(duì)待測(cè)的 Ag或 Ab 進(jìn)行定量 / 定性。
 
ELIA 具有高度敏感,可達(dá) Pg/ml 或 pmol ;特異性強(qiáng),可重復(fù)性好,CV<5%;測(cè)定范圍寬;試劑穩(wěn)定,無(wú)毒害,無(wú)污染,有效期長(zhǎng)。操作簡(jiǎn)單,易于自動(dòng)化。
 
三聯(lián)吡啶釕:
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三丙胺(TPA):
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如您需咨詢海貍磁珠等問(wèn)題可聯(lián)系東銳科技為您排憂解難。

 

 

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