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　　密理博超濾管的應用：

　　1、蛋白質(zhì)樣品濃縮、脫鹽及緩沖液置換。

　　2、樣品中去垢劑的去除；雙向電泳樣品的制備。

　　3、未結合標志物的去除。

　　4、尿液的濃縮。

　　5、核算樣品濃縮及脫鹽。

　　6、法醫(yī)鑒定分析樣品的預處理。

　　7、純化血清多肽做生物標志物；抗體的快速濃縮。

 

　　密理博超濾管的使用注意事項：

　　1、新買來的超濾是干燥的，使用前加入超純水，水量*過膜，冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出，即可加入蛋白液，加入的多少，以不超過管頂?shù)陌拙€為準。操作要輕，加入蛋白液前，超濾管需要插在冰上預冷。

　　2、選擇合適的超濾管。通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾管。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管。認真閱讀使用說明書，注意超濾膜對各種化學物質(zhì)的耐受程度有所不同。

　　3、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer，再濃縮至1ml左右，連續(xù)三次，zui后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定，一般不多于500ul，也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。

　　4、平衡。質(zhì)量和重心二者都要達到平衡。注意轉(zhuǎn)速和加速度不可太快，否則直接損壞超濾膜。開始離心超濾。不同離心機的轉(zhuǎn)速rpm換算成g之后，有所不同。離心機的加速度調(diào)至zui低檔，減小對膜的壓力。注意，一定要等離心機達到目的轉(zhuǎn)速之后，方可離開離心機，否則離心機出問題時，無法時間處理。膜與轉(zhuǎn)軸的方向根據(jù)說明書調(diào)整。在實際使用中，一般轉(zhuǎn)速開的比說明書里的要低，這樣可以延長離心管的使用壽命。

　　5、前面幾步用以濃縮蛋白，如果要換Buffer，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer，再濃縮至1ml左右，連續(xù)三次，zui后一次的濃縮終體積根據(jù)需要的蛋白濃度而定，一般不多于500ul，也有濃縮至200ul以內(nèi)的情況。按照每次至少10倍左右的體積濃縮算，三次達到1000倍以上，基本上可以達到換buffer的目的。

　　6、當濃縮到剩下1ml時，取50ul緩沖溶液，加入10ul流穿，看有沒變藍色，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了，將上層和流穿重新倒入新管中開始超濾。要判斷是否漏管，用5mgml的BSA離心10min，再取流穿，跑蛋白膠或Bradford粗測，繼續(xù)加入剩下的蛋白液濃縮，直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀，導致堵管。若發(fā)生沉淀，要確定沉淀的具體原因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適；前者可用多根超濾管同時超濾，降低濃度的辦法解決，后者的方法是換不同的緩沖溶液，直到蛋白不發(fā)生沉淀為止。