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常用的免疫組織化學(xué)染色方法(上)
更新時(shí)間:2021-08-13 瀏覽次數(shù):5452
常用的免疫組化染色方法很多,有直接法和間接法。直接法是將酶或熒光素等標(biāo)記在第一抗體上,然后用該被標(biāo)記的第一抗體與組織細(xì)胞中的抗原結(jié)合,即可以顯色或在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果;
間接法是將標(biāo)記物標(biāo)記在第二抗體或第三抗體(復(fù)合物)上,其方法是先將特異性的第一抗體與組織細(xì)胞中相應(yīng)的抗原結(jié)合,再將被標(biāo)記上標(biāo)記物的第二抗體與第一抗體結(jié)合,最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。
如果標(biāo)記物是標(biāo)記在第三抗體(復(fù)合物)上,則第二抗體與第一抗體結(jié)合后,再用被標(biāo)記上標(biāo)記物的第三抗體(復(fù)合物)與第二抗體結(jié)合,最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。
01 ABC 法
卵白素-生物素復(fù)合物(avidin biotin complex,ABC)法屬于親和免疫組織化學(xué)技術(shù),該方法是根據(jù)卵白素和生物素具有高度親和力的生物學(xué)特性,用生物素與過(guò)氧化物酶結(jié)合獲得生物素化過(guò)氧化物酶,生物素化過(guò)氧化物酶再和加入的卵白素形成卵白素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物即ABC復(fù)合物。
ABC法為三步法,第二抗體為生物素化的IgG,其中的Fab片段和第一抗體結(jié)合,生物素和ABC復(fù)合物中的卵白素結(jié)合,最后通過(guò)ABC復(fù)合物上的過(guò)氧化物酶參與顯色反應(yīng)而形成有顏色的不溶性沉淀物。由于卵白素和生物素的親和力很強(qiáng),所以ABC法較敏感,比PAP法敏感20~40倍。
02 LSAB(S-P) 法
標(biāo)記抗生物素蛋白鏈菌素-生物素(lablled streptavidinbiotin)法和ABC法相似,不同處是在第二抗體之后ABC法用ABC復(fù)合物而LSAB法用標(biāo)記了過(guò)氧化物酶的抗生物素蛋白鏈菌素(streptavidin,SA)。SA是從鏈霉菌屬蛋白分離出來(lái)的一種蛋白質(zhì),它僅標(biāo)記了過(guò)氧化物酶而本身沒(méi)有與生物素連接,生物素是連接在第二抗體上。
由于SA分子量較小,ABC復(fù)合物分子量大,因而SA穿透組織的能力比ABC復(fù)合物大,反應(yīng)速度快。SA有兩個(gè)和生物素親和力*的結(jié)合點(diǎn),其本身沒(méi)有連結(jié)生物素,可以與第二抗體上的生物素連結(jié)。這樣,SA比ABC復(fù)合物更容易與第二抗體上的生物素結(jié)合,因而SA的敏感性比ABC高,反應(yīng)所需的時(shí)間比ABC短。
如在實(shí)驗(yàn)中遇到困難,也可以選擇Leica全自動(dòng)免疫組化染色儀來(lái)協(xié)助您。
下期預(yù)告
酶標(biāo)聚合物(labelled dextran polymer,LDP)法
增強(qiáng)聚合物一步(enhanced polymer one setp,EPOS)法
催化信號(hào)放大(catlyzed signal amplification,CSA)法
抗生物素蛋白鏈菌素-生物素復(fù)合物(streptavidin biotincomplex,SABC)法