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常用的免疫組織化學染色方法(下)
更新時間:2021-08-25 瀏覽次數:2536
常用的免疫組化染色方法很多,有直接法和間接法。直接法是將酶或熒光素等標記在第一抗體上,然后用該被標記的第一抗體與組織細胞中的抗原結合,即可以顯色或在熒光顯微鏡下觀察結果;
間接法是將標記物標記在第二抗體或第三抗體(復合物)上,其方法是先將特異性的第一抗體與組織細胞中相應的抗原結合,再將被標記上標記物的第二抗體與第一抗體結合,最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結果。如果標記物是標記在第三抗體(復合物)上,則第二抗體與第一抗體結合后,再用被標記上標記物的第三抗體(復合物)與第二抗體結合,最后用顯色劑顯色或在熒光顯微鏡下觀察結果。
常用的EPOS一步法屬于直接法,EnVision二步法、PAP/APPAP法、LSAB(S-P)法、SABC法、和CSA法等屬于間接法。相對來說直接法特異性高,敏感性低,而間接法則敏感性高,特異性低。
抗生物素蛋白鏈菌素-生物素復合物(streptavidin biotincomplex,SABC)法方法和ABC法相類似,不同之處是SABC法用抗生物素蛋白鏈菌素代替了ABC法ABC復合物中的卵白素獲得SABC復合物。由于抗生物素蛋白鏈菌素與生物素的親和力更高,而且SABC復合物不需在使用前配制,所以SABC法比ABC法更加敏感和簡單。
酶標聚合物法(labelled dextran polymer,LDP)法應用了酶標聚合物技術,如EnVision檢測系統,首先將辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶標記在葡聚糖聚合物上,然后再與第二抗體連接而形成EnVision二抗。
LDP法屬于二步法,特異性一抗和組織細胞抗原結合后,再用EnVision二抗與抗原抗體復合物中的一抗結合,最后通過EnVision二抗上的酶參與顯色反應。
由于EnVision二抗中的聚合物結構的*,可以連接更多的二抗,使每個多聚物有超過20個位點與第一抗體結合,聚合物上能標記上的酶數量較多。因此在顯色時有充足的酶與顯色劑起反應。
因此LDP法的敏感性高于ABC、LSAB等方法。此外,LDP法中的第二抗體沒有生物素的存在,不會出現ABC、LSAB等方法中含有的生物素與組織中內源性生物素起交叉反應的現象,因此LDP法的非特異性背景染色極低。
增強聚合物一步法(enhanced polymer one setp,EPOS)法也屬于酶標聚合物法,和LDP法一樣,是利用酶標聚合物技術,將辣根過氧化物酶標記在葡聚糖聚合物上,然后再與第一抗體連接而形成EPOS一抗。
EPOS法屬于直接法,直接用EPOS一抗特異性和組織細胞抗原結合后,一抗上的酶參與顯色反應。由于EPOS一抗中的聚合物上能標記上的酶數量較多,在顯色時有充足的酶與顯色劑起反應。因此EPOS法雖然是直接法,但具有高敏感性。
此外,EPOS一抗沒有生物素的存在,不會出現ABC、LSAB等方法中含有的生物素與組織中內源性生物素起交叉反應的現象,背景清晰。但EPOS一抗種類較少,難以普及。
催化信號放大(catlyzed signal amplification,CSA)法是應用一種放大試劑生物素化酪胺,與抗生物素蛋白鏈菌素-生物素-過氧化物酶復合物(streptavidin biotin-HRP)連接,在過氧化物酶作用下形成大量的生物素沉積物,再加入抗生物素蛋白鏈菌素-過氧化物酶復合物后,過氧化物酶與生物素沉積物形成大量的過氧化物酶聚合,聚合的過氧化物酶與顯色劑起反應。在第三步應用了SABC法的SABC-HRP復合物,第五步應用了LSAB法的SA-HRP復合物。
由于CSA法加入了催化信號放大試劑,使信號不斷放大,因此敏感性比EPOS一步法、EnVision二步法、PAP/APPAP法、LSAB(S-P)法和SABC等方法高。特別適用于檢測較弱的組織抗原。
以上就是后四種常用的免疫組織化學染色方法的簡介。如在實驗中遇到困難,也可以選擇Leica全自動免疫組化染色儀來協助您。
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