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技術文章

細說腫瘤解離試劑盒的樣品收集、處理及保存方法

更新時間:2022-07-22 瀏覽次數:1875

  腫瘤解離試劑盒已被開發用于從人腫瘤組織中溫和、快速地產生單細胞懸液。 該試劑盒用于產生大量腫瘤細胞和腫瘤浸潤淋巴細胞,同時保留重要的細胞表面表位。該試劑盒與gentleMACS Dissociators結合,非常適合用于節省時間和可重復的制備單細胞懸液。
 
  腫瘤解離試劑盒試劑準備:
  1、使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25℃),試劑不能直接在37℃溶解。
  2、標準品(凍干品):每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管,每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
  3、濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進行30倍稀釋。
 
  腫瘤解離試劑盒的樣品收集、處理及保存方法:
  1、血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離;
  2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒;
  3、細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物;
  4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液;
  5、保存:如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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